"Is it okay if I use the bathroom?" "Of course not."

of 是介词，在这里与 course 搭配使用，表示"关于...的"。 course 的意思是"过程、路线"，在固定搭配中表示"当然"。 of course 是一个固定短语，表示"当然、自然"，用于肯定回答或表示同意。 not 在这里是否定词，但整个短语 of course not 实际上表示"当然可以"，是一种口语化的肯定回答方式。